气相色谱法

　　此方法测得的是食物中各种脂肪酸占总脂肪酸的百分比。样品处理简单，快速；方法准确，灵敏度高。

1.原理
　　气相色谱法是利用色谱柱中装入担体及固定液，用载气把欲分析的混合物带入色谱柱，在一定的温度与压力条件下，各气体组分在载气和固定液薄膜的气液两相相中的分配系数不同，随着载气的向前流动，样品各组分在气，液两相中反复进行分配，使脂肪酸各组分的移动速度有快有慢，从而可将各组分分离开。然后进行分别测定。

2.适用范围
　　此法适用于食物中脂肪酸的分析。

3.仪器
　　气相色谱仪
　　氢火焰离子化检测器
　　氮气 、氢气、压缩空气
　　微处理机
　　色谱柱2m×4mm或3m×4mm填充80--100目ChromosorbW，涂以8% 或10%（W/W）二乙二醇琥珀酸酯（DEGS）
　　气相色谱条件
　　柱温:210℃
　　进样器温度：280℃
　　检测器温度：280℃
　　氮气流速：40ml/cm2

4.试剂
　　所有试剂，如未注明规格，均指优级纯，所有实验用水，均为蒸馏水。
　　（1）石油醚（沸程30～60℃）分析纯
　　（2）苯
　　（3）无水甲醇
　　（4）0.4mol/L氢氧化钾--甲醇溶液：称2.24g氢氧化钾溶于少许甲醇中，然后用甲醇稀释到10ml。
　　（5）脂肪酸标准（SIGMA）
　　(6) 脂肪酸混合标准
　　CHAIN %BYWT
　　6:0 1.0
　　8:0 5.0
　　10:0 4.0
　　12:0 27.0
　　14:0 10.0
　　16:0 10.0
　　18:0 2.0
　　18:1 15.0
　　18:2 25.0
　　18:3 1.0

5.操作步骤
　　称取30--100mg（约2-6滴） 油脂，置入10ml量瓶内，加入1-2ml 30~60℃沸程石油醚和苯的混合溶剂（1：1），轻轻摇动使油脂溶解。加入1-2ml 0.4mol/L氢氧化钾-甲醇溶液，混匀。在室温静置5～10分钟后，加蒸馏水使全部石油醚苯甲酯溶液升至瓶颈上部，放置待澄清。如上清液浑浊而又急待分析时，可滴入数滴无水乙醇，1-2分钟内即可澄清。吸取上清液，在室温下吹入氮使浓缩，所得到浓缩液即可用于气层分析。

6.结果计算
　　在有微处理机的情况下，用归一化计算法则可自动打印出峰面积和各种脂肪酸占总脂肪酸的百分比。归一化计算法不能直接计算脂肪酸的总重量及各种脂肪酸的实际含量。

7.注意事项
　　同一样品的两次测定值之差不得超过两次测定平均值的5%。